高效液相色谱——串联质谱法检测骆驼乳中乳铁蛋白

2020年04月13日 标签:

高效液相色谱,串联质谱法检测骆驼乳中乳铁蛋白

乳铁蛋白是一种可以结合铁的糖蛋白,1939 年首次在牛乳中发现,1960 年由Johannson 从人乳中存在分离培养出来,据血清转铁蛋白,转科属在一起,卵转铁蛋白黑色素转铁蛋白,乳铁蛋白的分子量大小约为80kDa ,由一条折叠成一个两个球状裂片的多肽链可以组成,能够通过结合企业两个铁原子。

建立了超高效液相色谱串联质谱法,并基于特征肽验证了骆驼乳中乳铁蛋白的测定方法,骆驼的乳铁蛋白通过肝素亲和层析纯化,然后用于筛选胰蛋白酶肽标签。在序列信息数据库可以搜索的基础上我们选择一个特征肽,并通过超高效液相色谱和四极杆飞行活动时间串联质谱分析法从纯化的骆驼科铁蛋白的胰蛋白酶水解反应产物中进行分析鉴定,包括将翼同位素标记肽,脂质,和酪蛋白处理过的前处理工序,然后用胰蛋白酶消化,分析物在Acquity UPLC BEH 300 C18柱上分离,然后通过在三重四极质谱仪上在7分钟内检测。试验和定量限值分别为3.8毫克公斤-1和11毫克公斤-1。回收率为74.5%-103.6%和低于7.7%的相对标准偏差应用该方法进行测定了新疆10个样品中乳铁蛋白的含量。

从骆驼奶中提取的骆驼乳铁蛋白的SDS-PAGE;Lane 1,分子量标准;Lane 2,牛乳乳铁蛋白;Lane 3,纯化骆驼乳铁蛋白