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高效液相色谱仪对城市排水污染物中苯并[a]芘的含量检测方法
作者:  浏览量:1527  发布时间:2019-03-01 10:06:52

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摘要此文探讨了大豆脂肪酸快速气相色谱分析方法,不需从原料中提取脂质,直接将磨碎原料中的脂质皂化、甲脂化后,利用色谱柱HP519091J413进行气相色谱分析。结果表明:软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸的出峰时间依次为657、7.838.73&86、9.06mi。这种方法的优点是快速、操作方便、节省药品;即使在较低的杂交世代样品很少,用普通法不易提取脂质时,此法也能顺利地完成分析工作。

关键词大豆;脂肪酸;气相色谱分析


解浸提,取上清甲酯化,采用醇钾作为甲酯化试剂,酯化反应速度快并酯化完全,甲酯化后离心取上清用HP5色谱柱进行GC分析,获得了一种快速检测大豆脂肪酸组分的气相色谱分析法。


一、材料准备:

仪器和试剂气相色谱。

标准品:软脂酸(>99%)、硬脂酸(>99%)、亚油酸、油酸、亚麻酸(>99.3%,购于Sgma公司)。
试齐…正己烷(>97%,AR)甲醇


二、方法
1甲酯化试剂制备
取分析纯氢氧化钾2244g放入带磨口的棕色试剂瓶中,取100mL甲醇沿玻璃棒注入试剂瓶中,
大豆油脂是由脂肪酸和甘油组成,其中脂肪酸占油脂总量的90%以上,是油脂的主要成分。大豆油脂的特性与其所含不饱和脂肪酸的组成与配比有关。大豆油脂不饱和脂肪酸中所含的亚油酸(18:2)和亚麻酸(18:3)是哺乳动物自身不能合成的,该重要营养物质必须从植物油脂中获得。大豆是亚油酸含量较高的油用作物,可防止血清中胆固醇的增加和沉积,软化血管,对防治高血压和心血管疾病均有重要作用。亚麻酸对维持细胞膜的稳定性和调节细胞膜适应性具有极其重要的生物学意义。


大豆脂肪酸均采用色谱分析法测定,但不同研究者所采用的进样样品前处理方法和酯化试剂不同。前人分析大豆脂肪酸组分,通常采用索氏抽提法或二氧化碳临界萃取法先提取脂肪提取脂肪要浪费大量的时间,提取脂肪后再使用有机溶剂溶解脂肪。现对Ssana等方法进行了改进,将磨碎原料中的脂质不进行提取直接用正己烷溶用玻璃棒搅拌3mn在室温下反应2h后,待用,如不用立即放于4。C冰箱中保存,可使用3d。1.3样品处理称取033g已粉碎的大豆样品于L5mL的离心管中,加入ImL正己烷,充分振摇0.5min室温放置5I;然后将上清液移入另一只15mL离心管中,在上清离心管加入已配好的05mL甲酯化试剂进行甲酯化反应,振荡2min在室温下反应1h。移上清,在6000I-mil-1离心机离心5min然后上清进样GC分析。14GC分析条件色谱柱HP519091J-413(30mx320Umx0.25Um);进样量1UL,分流进样方式,分流比50:1;进样口温度:220°C;载气:Nq45mL‘mn?氢气:40mL‘min-1;空气450mL‘mh-1。程序升温:150°C下保持Imin然后以20°0mif1的速率升至200°C,保持3min再以10°C‘min-1的速率升至250。C,保持2mi。检测器:氢火焰离子检测器(FD),检测器温度恒温275。C。


2结果与分析
与传统方法比较运用毛细管气相色谱进行分离,经甲酯化的脂肪酸成分,通过色谱数据工作站689Q利用峰面积归一化法,测得各化学组分在脂肪酸中的百分含量。该方法快速、操作方便、节省药品;即使在较低的杂交世代样品很少,用普通法不易提取脂质时,此法也能顺利地完成分析工作,与其它方法的区别见表1。


1快速分析方法与其他方法比较

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从大豆样品脂肪酸色谱图(图2)中可以看到,整个色谱分析时间10min就可以完成,软脂酸的出峰保留时间为657min硬脂酸为7.幻min,油酸为873min亚油酸为886min亚麻酸为906mi。

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                         图1大豆脂肪酸标准品气相色谱图
出峰时间非常稳定,1054次分析中出峰时间结果致,与王晓燕等相比出峰时间早了。


三、主要脂肪酸测定结果
大豆籽粒中主要含有5种脂肪酸,按出峰顺序依次是软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸(图的样品量少,因此适合在较低的杂交世代分析脂肪酸含量,实现特异脂肪酸含量的低世代选择,提高育种效率。采用醇钾作为甲酯化试剂,酯化反应快速且完全。但是甲酯化试剂需要现用现配,甲酯化试剂只能使用3d,超过3d的试剂起不到酯化的效果,无法检出脂酸酸甲酯。结果发现,当甲酯化超过20h时,样品的检出效果不好,得到的峰值偏低。因此,在做大量样品分析时,需要分批量做样品前处理,每次甲酯化20份左右材料为宜,以免甲酯化超过20h导致检测结果不准确。

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