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高效液相色谱仪检测器原理讨论
作者:  浏览量:537  发布时间:2017-10-31 03:31:05

一、高效液相色谱仪检测器原理讨论简述

高效液相色谱仪主要由色谱泵及控制器、进样器、色谱柱、检测器和数据处理及控制五大部分组成,分离原理是一个物理过程,流动相携带着待分析化合物和其他一些共存物质流过色谱柱,利用不同物质在固定相上的保留时间不同,从而出峰时间不同而达到分离,利用保留时间定性,峰高或者峰面积定量,在将分离后的各个成分依次通过检测器时就可检测出各化合物的浓度。而检测器作为高效液相色谱仪的重要组成部分,直接决定分析的准确度和灵敏度。


二、高效液相色谱仪检测器的类别

一般常用的有紫外检测器、检测器VWD(可变波长检测器、WAD监测器、电导检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、质谱检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、激光检测器等。

高效液相色谱仪检测器原理讨论


三、液相色谱紫外可见吸收检测器

高效液相色谱仪检测器原理讨论

它简称紫外检测器(UV),是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm~800nm)。它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度,而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感,因此既可用于等度洗脱,也可用于梯度洗脱。


四、液相色谱二极管阵列检测器

高效液相色谱仪检测器原理讨论

二极管阵列检测器是以光电二极管阵列(或CCD阵列,硅靶摄像管等)作为检测元件的紫外-可见吸收检测器。它可构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号,然后,对二极管阵列快速扫描采集数据,得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。与普通紫外-可见吸收检测器不同的是,普通紫外-可见吸收检测器是先用单色器分光,只让特定波长的光进入流动池。而二极管阵列紫外-可见吸收检测器是先让所有波长的光都通过流动池,然后通过一系列分光技术,使所有波长的光在接受器上被检出。


五、液相色谱示差检测器

高效液相色谱仪检测器原理讨论

示差检测器是基于连续检测样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。光从一种介质进入另一种介质是,由于两种物质的折射率不同就会产生折射。它可与输液泵,色谱柱,进样器等组成凝胶渗透色谱仪或高速液相色谱仪系统,也可以配置适当的进样系统作为单独的分析仪器使用。对所有溶质都用响应,某些不能用选择性检测器检测的组分,如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等,可用示差检测器检测。


缺点是不能做梯度实验,灵敏度低。室温的变化会影响基线的稳定性,大的溶剂前沿峰可能会掩盖前期脱洗的色谱峰。


六、液相蒸发光散射检测器

高效液相色谱仪检测器原理讨论

ELSD检测只要分为三个步骤:

1)用惰性气体雾化脱洗液;

2)流动相在加热管(漂移管)中蒸发;

3)样品颗粒散射光后得到检测。

ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物,如:碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂 、药物,并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物 。消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点,不同于紫外和荧光检测器 ,ELSD的响应不依赖与样品的光学特性,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,不受其官能团的影响,与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。另外,低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰,并要求分析化合物带有发色团。ELSD不受这些限制,能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线,使得分析率更好、分离速度更快。


七、液相色谱荧光检测器

荧光检测器是用紫外线照射色谱馏分,当试样组分具有荧光性能时,即可检出。其特点是选择性高,只对荧光物质有响应;灵敏度也高,适合于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析。也可用于检测不发光但经化学反应后可发荧光的物质。


八、质谱检测器

高效液相色谱仪检测器原理讨论

质谱法是采用高速电子来撞击气态分子或原子,将电离后的正离子加速导入质量分析器中,然后按质荷比(m/z)的大小顺序进行收集和记录,即得到质谱图。质谱不是波谱,而是物质带电粒子的质量谱。


用组合合成技术合成的化合物通常是用HPLC联合低波长紫外或质谱检测进行分析,但是,在缺乏已表面活性剂非常灵敏,并在梯度脱洗下维知结构参数已知的参照标准品情况下,两种方法都不能准确的定量分析此种系列化合物。


九、电导检测器

高效液相色谱仪检测器原理讨论

所有的离子化合物以及可被解离的化合物的水溶液能够导电,电导检测器就是以液相色谱流动相的导电度的变化作为定量依据的,流动相携带样品通过流通池,空白流动相会产生一个导电值,流动相加样品的电导减去流动相的电导既为样品产生的电导值,该值与待测样品浓度成正比。


十、液相色谱检测器的性能比较

高效液相色谱仪检测器原理讨论

高效液相色谱仪检测器原理讨论



十一、高效液相色谱仪检测器原理讨论总结

高效液相色谱法是一种快速有效的有机化合物分析技术。检测器是高效液相色谱仪的重要组成部分,不同的检测器的原理和使用的范围和对象不同。所以针对不同的检测器,我们应该注意的重点也不同。只有这样,才能更好的完成日常的分析检测工作,提高工作效率。


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