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高效液相色谱法在药物分析中的应用
作者:  浏览量:307  发布时间:2017-08-21 02:36:27

高效液相色谱法在药物分析中的应用

一、概述

高效液相色谱结合了液相色谱法和气相色谱法的分析分离原理,具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高和应用范围广等优点,本文主要介绍了离子色谱法、反相高效液相色谱法、超高效液相色谱法在药物分析中的应用非常广泛。


二、高效液相离子色谱法在药物分析中的应用

离子色谱法是美国 Small等人在离子交换色谱法的基础上建立起来的一种离子分离分析液相色谱技术,以其灵敏、快速、精密度高、抗干扰能力强等优点,主要应用于药物及合成中间体的分析、复杂组分中的某一组分鉴定、药物离子的价态及形态分析等方面。


晏菊姣等建立了离子色谱法测定注射用头孢他啶中碳酸钠的含量,钠离子浓度在2mg/L~20mg/L范围内呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率为100.6% (n=9),测得定量限为0.002mg/L,该方法采用 Ionpac CG12A,CS12A阳离子交换柱,淋洗液为18mmoL/L 甲烷磺酸,CSRS-ULTRA 4mm自动抑制循环模式,抑制电流为60mA。


张伟等采用高效阴离子交换色谱法测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量,采用 IonPac AS11-HC离子交换柱(4mm×250mm),流动相为20mmol/L的 NaOH 溶液,等度洗脱 20min,采用 ASRS 4mm阴离子抑制器,电导检测器,测得枸橼酸离子浓度在 0.1~2.0μg/mL范围内,对照品色谱峰面积与枸橼酸离子浓度呈良好的线性关系,r=0.9990,总平均回收率 97.80%,RSD为0.69%,该方法的检测限为 0.01μg/mL,弥补了《中国药典》三部(2010版)中规定方法的不足之处。


三、高效液相反相高效色谱法在药物分析中的应用

反相高效色谱法是指流动相极性大于固定相极性的分配色谱法,适用于分离非极性至中等极性的各类分子型物质,应用范围也比正相色谱法更广泛。


陈德志等建立同时测定咪达唑仑、硝西泮、地西泮3种药物血药浓度的反相高效液相色谱法,色谱柱为 Symmetry shield RP18 柱(250mm×4.6mm,5.0μm),流动相为甲醇 - 磷酸盐缓冲液(55:45,v/v,pH2.15),咪达唑仑、硝西泮、地西泮质量浓度在 20-4000ng/mL范围内与峰面积呈良好线性关系(r≥0.9996,n=5),回收率98.2%~103.9%之间。


翁水旺等建立反相高效液相色谱法分离测定奥美拉唑肠溶胶囊的含量及有关物质的方法,采用 VARIAN C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇 - 水 - 三乙胺 - 磷酸(67:33:0.3:0.12)为流动相,检测波长为302nm,测得奥美拉唑在浓度4.0μg/ml~40.0μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.99999,平均回收率为100.3%,RSD为 0.17%。


钟延霞等建立了反相高效液相色谱法测定吉非替尼的方法,采用Hypersil BDS C18-5μm(250mm×4.6mm)色谱柱,流动相为乙腈-0.15%三氟乙酸(体积比为2∶8),紫外检测波长254nm,吉非替尼的质量为6.824 0μg~34.1200μg时线性关系良好,线性系数为0.99908,加标回收率大于95%,检测底限为20.7248μg。


赵军等建立了反相高效液相色谱法同时分离测定6种临床最常用的头孢菌素(头孢他啶、头孢拉定、头孢氨苄、头孢哌酮、头孢唑林、头孢噻肟),采用SHIM-PACK VP-ODS色谱柱,以乙腈及0.05mol/L HAC-NaAC缓冲溶液(pH=4.0)组成流动相梯度淋洗,在15min内分离并测定了上述 6 种头孢菌素,6种药物最低检出限均可达到 0.20μg/mL。


四、超高效液相色谱在药物分析中的应用

超高效液相色谱系指一种采用小颗粒填料色谱柱(粒径小于2 μm)和超高压系统(压力大于105 kPa)的新型液相色谱技术,能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度,同时大大缩短分析周期,其较大的峰容量和更高的灵敏度更适于中药中多成分的分析。


唐军等建立了一种快速测定血栓通注射液中5种皂苷成分(三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd)含量的方法,应用新型的超高效液相色谱系统,使用1.7μm填料的BEH C18色谱柱(50mm×2.1mm),乙腈-水两相溶剂梯度洗脱,5种皂苷成分在测定的浓度范围内线性关系良好,r>0.9984,RSD小于3.1%,最低定量限和最低检测限可分别达到0.5ng和0.2ng,平均回收率均大于95.0%。


五、高效液相色谱联用在药物分析中的应用

胡晓玲等建立超高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS)测定健康人血浆中阿托伐他汀浓度,阿托伐他汀浓度在0.385ng/mL~15.400ng/mL线性关系良好,相关系数达0.9974,日内、日间RSD符合方法学要求。


陈吉汉等建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS)测定鸡肉与鸡蛋中 6种他汀类药物残留量。色谱柱为BEH C18,以甲醇-0.1% 甲酸 5mmol 乙酸铵为流动相,梯度洗脱分离,6 种他汀类药物在 1.0~100μg/kg浓度范围内线性良好,r>0.9910,检出限和定量限分别为 0.1~0.5μg/kg和0.3μg/kg~2.0μg/kg。


王映红等应用高效液相-核磁共振联用技术(LC-NMR)对微量级蛇葡萄根提取物中混合物的各个组分进行分离,并获得1H NMR及COSY谱,通过与此类化合物所建立的氢谱数据库进行比较分析,确定了微克级的天然产物混合物中的主要组分的化学结构及立体结构,使微量天然混合物中的主要组分的化学结构及立体结构得到证实,充分体现了LC-NMR技术的微量、快速的特点。


六、高效液相色谱法在药物分析中的应用前景预测

高效液相色谱法选择性高、灵敏度高、分析速度快,并可同时用于有关物质检查与含量测定的特点,成为医药研究的有力工具,在天然药物及复方成药分析,抗生素分析,手性药物分析,临床治疗药物检测等领域均需用到HPLC的不同测定方法。


由于化学药品的开发费用昂贵,而且毒副作用大,近年来人们已把目光转向自然、民族传统医药、草药、植物药等天然药物,据世界卫生组织统计,当前全世界60多亿人口中80%的人使用过天然医药。在全世界药品市场中,天然物质制成的药品已占30%,国际上植物药市场份额已达300亿美元,且每年以20% 以上的速度增长。高效液相色谱法分析必定能为我国传统中医药实现现代化,走向世界提供强有力的技术支持。 



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