联系科捷

一、概论

本文讲述的是利用气相色谱仪对饲料中三聚氰胺的测定方法，适用于配合饲料，预混料、植物性蛋白粉、浓缩饲料、饲料添加剂、宠物饲料中三聚氰胺的测定，气相色谱质谱法分别为2.0mg/kg和0.05mg/kg，高效液相色谱的Z低检测浓度分别为0.5mg/kg。

二、方法提要

试样中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，用阳离子交换柱净化，用BSTFA衍生化，用气相色谱-质谱进行定性和定量分析。

三、试剂和材料准备

衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）

仪器准备：科捷气相色谱仪

二、分析步骤

1、植物蛋白和饲料中三聚氰胺的提取

称取5.0g样品，准确加入48ml1％的三氯乙酸溶液，加入2mL饱和醋酸铅溶液。摇匀，超声提取20min。取提取液约30mL转入离心管，在10000rpm离心机上离心5min。

2、宠物饲料中三聚氰胺的提取

称取5.0g样品，在索式提取器中用**回流6h去除脂肪。脱脂残渣准确加入48ml1％的三氯乙酸溶液，加入2mL饱和醋酸铅溶液。摇匀，超声提取20min。取提取液约30mL转入离心管，在10000rpm离心机上离心5min。

3、净化

m滤膜，滤液用于液相色谱测定。m MCX柱活化和上样：分别用3ml甲醇，3ml水活化MCX柱，准确移取10mL离心液分次上柱。再用3ml水和3ml甲醇洗涤MCX柱，抽近干后用5％氨化甲醇溶液（4.5）3ml洗脱。洗脱液于氮吹仪上50℃氮吹至干，用2+8甲醇水定容，过0.45。

4、衍生化

L的BSTFA，混匀，在70℃衍生30min。同时用三聚氰胺标准系列做同步衍生。mL的吡啶和200m将6.2的净化液吹干，加入200。

三、测定

1、准备

柱子：DB-5MS柱

载气：He 流速: 1.3 ml/min 平均线性速度: 35 cm/sec 压力: 17.5 psi (initial)模式:恒流

进样：不分流或分流进样 (1:20)，进样体积为1µl，进样温度: 250ºC

升温程序：起始温度为75ºC，持续1.0 min，以30ºC/min升温至300ºC，保持2.0min。传输线温度为280ºC。

运行时间:  10.5 min

质谱条件：质量范围: 40-450 amu

扫描模式：全扫描 (Electron Ionization)

溶剂延迟:  4.2 min (splitless); 3.8 min (split)

四极杆: 150ºC

离子源: 230ºC

监测离子：特征离子 171，99，73；分子离子：327，342

2、定性定量方法

定性方法：样品与标准品保留时间的相对标准偏差不大于0.5%。特征离子基峰百分数与标准品相差不大于20％。

定量方法：选择离子监测（SIM）法计算峰面积，单点或多点校准法定量。

四、结果结算和表述

按照下式计算试样中三聚氰胺的含量：

公式参数：

W－试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每公斤（mg/kg）；

V－样品Z终定容体积，单位为克（g）；

g/L）；mc－由标准曲线而得的样液中三聚氰胺的含量，单位为微克每升（

m－试样量，单位为克（g）。

平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

五、允许差

取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两个平行测定的相对偏差不大于20％。