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液相色谱仪分析的改善分离条件
作者:  浏览量:403  发布时间:2017-10-31 03:43:46

液相色谱仪分析的改善分离条件

本文从影响高效液相色谱仪分离度的因素开始分析出液相色谱仪分析的改善分离条件。希望对大家有所帮助。


一、影响高效液相色谱仪分离度的因素

影响高效液相色谱仪分离度的因素有色谱柱填充性能、流动相和流速等。


1、色谱柱填充性能:

高效液相色谱柱的分离性能由固定相粒度、柱长和柱压降(由柱内径和柱填充状况决定)决定,这三个参数度也决定了样品组分的保留时间。保留时间不仅与色谱过程的热力学因素k有关,还与决定柱效和分离度的柱性能参数及流动相的粘度有关,这些参数都是影响色谱分离过程动力学的重要因素。


在高效液相色谱中,色谱柱的制备是一项技术要求非常高的工作。


2、流动相:

高效液相色谱中,改变淋洗液组成和极性是改善分离的最直接因素,不可能通过增加柱温来改善传质。因此,高效液相色谱大多是恒温分析。流动相选择在高效液相色谱中显得特别重要,流动相可显著改变组分的分离状况。


3、流速:

流速大于0.5cm/s时,H-u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速,柱效提高不是很大。但在实际操作中,流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要参数。


二、液相色谱仪分析的改善分离条件

液相色谱仪分析的改善分离条件:在液相色谱仪定量分析中,分离开是首要要求。基线分离是提供精确结果的有效保障。含有5个组分或更少的样品,使谱峰之间达到基线分离(R>1.5)一般较为容易。分离度会随色谱柱的使用时间逐步降低,也会由于分离条件的微小波动而在不同时间有所变化,因此在建立简单混合物的分离方法时,最好使R≥2。这样的分离度将有利于改善测试精度和方法的普适性;含10团种或10种以上组分的样品,分离一般会很困难,目标分离度往往必须降低至R>1.0—1.5。


有些HPLC测定不必使全部被测组分达到基线分离,这种情况最常见于所测样品中可能存在数种化合物但仅需检测其中的一种时。比如在普查水或土壤样品中的某污染物(如定性分析不同的除芳剂)时,仅需要分离出个别除莠剂,确定其特征保留时间进行峰鉴别即可。


尽管大多数HPLC设备能在更高的压力下工作,使用新色谱柱的工作压力不应超过170bar(2500psi,17MPa),压力上限最好在2000psi以下。


限制该压力基于两点原因:第一.随着色谱柱的使用,微粒杂质会逐步堵塞柱头,使柱压成倍升高;第二.较低的压力(<170bar)适于泵、进样阀、尤其是自动进样装置的稳定工作,密封垫的寿命更长,色谱柱堵塞的情况减少,系统的耐久性明显提高。因此,最好以小于泵的最大允许压力的50%作为目标压力。


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