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高效液相色谱仪操作常见现象及其原理
作者:  浏览量:308  发布时间:2017-09-25 10:54:13

高效液相色谱仪操作常见现象及其原理

一、高效液相色谱仪应用范围

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。


高效液相色谱仪应用的高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。


HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于高效液相色谱仪具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。


二、高效液相色谱仪操作过程

高效液相色谱仪在使用过程中要注意轻拿轻放。操作过程: 

1、开机操作:

1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开BootpServer一般启动时已打开); 

2)、自上而下打开个组件电源,BootpServer里显示有信号时有六行字符),打开工作站先打开Online); 

3)、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关需用针捅抽),控制流量大小,以能流出的最小流量为准; 

4)、注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于最低限会自动停泵,注意洗泵溶液的体积,及时加液; 

5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态,及时正确处理各种突发事件。 


2、先以所用流动相冲洗系统一定时间如所用流动相为含盐流动相,必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相),正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯,以延长灯的使用寿命; 


3、建立色谱操作方法,注意保存为自己命名的Method,勿覆盖或删除他人的方法及实验结果; 


4、使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡; 


5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎,在更换流动相时注意保护,当发现过滤头变脏或长菌时,不可用超声洗涤,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤; 


6、实验结束后,一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上,再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯;

 

7、关机时,先关闭泵、检测器等,再关闭工作站,然后关机,最后自下而上关闭色谱仪各组件,关闭洗泵溶液的开关; 


8、使用者须认真履行仪器使用登记制度,出现问题及时向老师报告,不要擅自拆卸仪器。


三、高效液相色谱仪操作常见现象及其原理:

1、高效液相色谱仪操作常见现象

超声波震荡了一个小时的流动相,为什么天气晴好的时候没出现气泡,阴天、下雨天就会出现;是因为阴天、下雨天空气气压下降,引起溶在流动相中的空气过饱和晴天时气压高还没饱和),当高压泵抽取流动相时,空气析出,产生了气泡。

 

超声波震荡了一个小时的流动相,为什么里面还有空气呢?这是由于在常压下震荡,驱赶空气效果不行。

 

如果把装流动相的瓶子进行抽真空,同时进行超声波震荡,效果会怎么样呢?效果非常好,只要1min,流动相中的空气差不多没了;经过这样驱逐空气的流动相,阴天、下雨天使用也不会出现气泡了;而且省时,不用动不动半小时、一小时超声波震荡;并且效果非常好。

 

由于气泡的存在,会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰,严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定,使基线起伏。

 

2、造成上述高效液相色谱仪操作常见现象的原理

1)、是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;

2)、是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净;

3)、是在注入样品时不注意混入了空气。


以上是小编对高效液相色谱仪操作常见现象及其原理的一些看法,供大家讨论交流,如有不对的地方,欢迎指出。

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