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高效液相色谱仪操作过程及注意事项
作者:  浏览量:319  发布时间:2017-08-21 11:15:29

高效液相色谱仪操作过程及注意事项

一、高效液相色谱仪操作过程

1.翻开HPLC工作站(包含计算机软件和色谱仪),衔接好活动相管道,衔接检测体系。

2.对抽滤后的活动相进行超声脱气10-20分钟。

3.过滤活动相,根据需求挑选不一样的滤膜。

4进入HPLC操控界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。

5.有一段时刻没用,或许换了新的活动相,需求先冲刷泵和进样阀。冲刷泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲刷进样阀,需求在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲刷时速度不要超越10ml/min。

6.调理流量,初度运用新的活动相,能够先试一下压力,流速越大,压力越大,通常不要超越2000。点击injure,选用适宜的流速,点击on,走基线,调查基线的状况。

7.规划走样办法。点击file,选择select?users?and?methods,能够选择现有的各种走样办法。若需树立一个新的办法,点击new?method。选择需求的配件,包含进样阀,泵,检测器等,根据需求而不一样。选完后,点击protocol。一个完整的走样办法需求包含:a.进样前的稳流,通常2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject变换;d.走样时刻,随不一样的样品而不一样。

8.进样和进样后操作。选定走样办法,点击start。进样,一切的样品均需过滤。办法走完后,点击postrun,可记载数据和做符号等。悉数样品走完后,再用上面的办法走一段基线,洗掉剩余物。

9.关机时,先关计算机,再关液相色谱仪。 


二、高效液相色谱仪操作注意事项

流动相:

1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水,酸碱液及缓冲液需经过滤后使用,过滤时注意区分水系膜和有机系膜的使用范围,并进行超声除气处理。

2、 水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止长菌变质。


样品:

1、 采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含固体颗粒;

2、 用流动相或比流动相弱(若为反相柱,则极性比流动相大;若为正相柱,则极性比流动相小)的溶剂制备样品溶液,尽量用流动相制备样品液;


泵:

1、泵在使用过程中不能把气泡泵进入仪器。

2、泵自清洗液体应该应经常更换(一般为一周)。

3、仪器在长期不使用时应把泵、流动相过滤器及管路保存在有机相溶剂条件下。


进样阀:

1、使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针针,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡;

2、 手动进样时,进样量尽量小,使用定量管定量时,进样体积应为定量管的2倍以上。


色谱柱:

1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如pH值范围、流动相类型等;

2、 使用符合要求的流动相;

3、 使用保护柱;

4、 如所用流动相为含盐流动相,必须先用水与有机相相同比例流动相冲洗20分钟以上再换上含盐流动相反相色谱柱使用后,使用后,先用水与有机相相同比例的流动相冲洗,再用纯有机相冲洗。

5、 色谱柱在不使用时,应用有机相冲洗,取下后紧密封闭两端保存;

6、 不要高压冲洗柱子;

7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱;

8、 使用过程中注意轻拿轻放。


以上的高效液相色谱仪操作过程及注意事项希望可以帮到大家,以提高高效液相色谱仪的使用寿命,在试验中并得到稳定精确可靠的数据。


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